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小 麦 叶 片 总 抗 氧 化 能 力 测 定 （ F R A P 法 ）
一、
实验原理
FRAP 法 测 定 总 抗 氧 化 能 力 的 原 理 是 酸 性 条 件 下 抗 氧 化 物 可 以 还 原 Ferric-tri-pyridyl-tria-zine（Fe
3+-TPTZ）
产生蓝色的 Fe2+-TPTZ,随后在 593nm测定蓝
色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制 内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于 10 yM,因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显着干扰
FRAP法的检测反应。由于
反应体系中的铁离子或亚铁离子是和 TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂 通常也不会显着影响检测反应。
Antioxidant
Fe3+-TPTZ （橘黄色） ------------- > Fe2+-TPTZ （蓝色）
二、 实验步骤
1. FRAP工作液配制：
0.3 MpH3.6醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL用1MHCI 调节pH至3.6 ;
10mmol/L TPTZ溶液 25mL 0.078g TPTZ 用 40mM盐酸溶液定容至 25mL 20mmol/L FeCh溶液 50mL 2.78g 用 RO水定容至 50mL
上述溶液以 10:1:1 的比例混合（现配现用） 。
2. 取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取1.5mL 12000g离心10min （4oC）,取 上清液。 3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37°C条件下水浴10min,于593nm 处测定
吸光度，
4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSO的标准液替代样品绘制标准曲线。
三、 结果计算
以1.0mmol/L的FeSQ为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个 FRAPfi, 计算结果
Z82 Ferric Reducmg/Antioxidant Power (FRAP) assay Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L1 TPTZ solution in 40 mlVI L1 HGI plus 2,5 mL 20 mM L1 FeCI3 and 25 mL 0.3 M L1 acetate buffer, pH 3.6 was prepared freshly and warmed at 37cC. After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incub^tion at 37°C for 5
absorbanee of the reaction
mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4 based on the standard curve for FeSO4 x 7H2O at a concentration range between 100 and 1000 uM L_1 [31].
[1] Be nzie IF F, Strain J J. The Ferric Reduci ng Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of nt
Power” ： The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70
-6.
“ An tioxida
[2] Katarz yna Szafra n ska, Rafa? Szewczyk, Krysty na Maria Jan as. In volveme nt of melato nin applied to Vigna radiata, L. seeds in pla nt resp onse to chilli ng stress[J]. Cen tral Europea n Jour nal of Biology, 2014,
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本文来源：https://www.wddqxz.cn/3965a7d4cbd376eeaeaad1f34693daef5ef71328.html
2022-04-13
