2009植物生理学实验技术复习

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植物生理学实验技术相关问题



一、填空题

1．用洋葱的内表皮观察细胞质壁分离前要先用 中性红 溶液染色，小液流法测定植物组织水势时一般要加 甲烯兰 进行染色，其目的都是为了 便于实验结果的观察 。观察植物细胞质壁分离时应从 高 浓度的蔗糖溶液向 低 浓度的蔗糖溶液依次进行镜检。

2．用直射光照射叶绿体色素提取液时，发现在反射光下色素提取液呈 红色 ，在透射光下呈 绿色 ，这种现象称为 荧光现象 现象。

3．用红墨水法测定种子的生活力时，胚变红的种子是 死种子 ，胚不变红的种子是 活种子 。

4．用TTC法测定种子的生活力时，胚变红的种子是 活种子 ，胚不变红的种子是 死种子 。

5．纸层析分离叶绿体色素时，按照色素在两相中扩散的速度不同，从快到慢的次序依次是β-胡萝卜素 、 叶黄素 、 叶绿素a 、 叶绿素b 。

6．TTC法测定植物根系活力时所用的提取液和参比液是 乙酸乙酯 ；提取和定量测定叶绿体色素时所用的提取液和参比液是 80%丙酮 。

7．植物细胞膜脂过氧化作用的产物是 丙二醛（MDA） ，实验室提取该产物所用的提取液是 H2O或TCA 。

8．用移液管移液时，准确的读数方法应该是目光与 液体凹面的切线 相平行。 9. 在研磨植物材料的过程中通常要加入石英砂，其目的是有助于将植物材料快速地磨碎。

二、问答题

1. 试比较快速测定种子生活力的红墨水法和TTC法的优缺点。 答：（1）红墨水法：优点：快速、简便，费用低。 缺点：结果不太准确。 （2）TTC法：优点：结果比较准确。

缺点：反应时间较长，费用较高。



2. 试比较提取叶绿体色素的研磨法和浸提法的优缺点。 答：（1）研磨法：优点：快速，时间短。

缺点：提取的叶绿体色素损失相对较多，结果比实际值要低；

操作相对比较麻烦。

（2）浸提法：优点：结果比较准确，叶绿体色素损失相对较少。

缺点：反应时间较长。



3．实验室最常用的膜脂过氧化作用的测定指标是什么？细胞受伤后为何膜透性会变大？膜透性变大有何害处？ 答：（1）实验室最常用的膜脂过氧化作用的测定指标是丙二醛（MDA）；

（2）细胞受伤首先是细胞膜受到损伤，如膜脂在活性氧等的作用下发生过氧化作用，蛋白质凝集，膜液晶相结构受到破坏，膜透性变大；


（3）膜透性增大后，膜内物质外渗,，膜外有害物质侵入，使正常代谢紊乱；

4.采用TTC法测定植物根系活力，在TTC溶液配制及实验过程中有哪些因素会影响实验的结果？ 答：（1）光：TTC见光易分解，因此，TTC溶液最好现配现用，配好后应低温避光保存；整个反应也应该在黑暗条件下进行。

（2）温度：反应最好在35℃-37℃的条件下进行，低温和高温都会影响到根系的呼吸作用，从而影响根系活力测定的结果。

（3）pH值：反应液的pH值应尽可能保持在中性条件下，pH值过高或过低都会影响根系活力的测定。

5.研磨法提取叶绿素时为什么要加入少量的CaCO3？提取过程中应该注意哪些问题？ 答：（1）加入少量CaCO3的目的是为了防止在弱酸性条件下提取液中的H+取代叶绿素分子中的Mg2+，形成去镁叶绿素，影响后面的测定和分析。

（2）注意事项：

① 提取时间应尽可能短，以防止因叶绿素的分解而造成的损失。

② 提取时应尽可能在弱光下进行，并避免光线对样品的直接照射，以防止叶绿素见光分解而造成的损失。

③ 提取用的丙酮溶液易挥发，而且具有一定的刺激毒性。使用时注意通风，不用时应该及时盖上瓶盖，防止挥发。

④ 研磨、过滤时应尽可能充分彻底，以减少叶绿素的人为损失。

6.快速测定种子生活力常用哪两种方法？哪一种方法更精确一些？为什么？ 答：（1）目前快速测定种子生活力的方法常用TTC法和红墨水法。 （2）TTC法要更好一些。因为TTC法是利用种子的呼吸作用将TTC还原成TTCH，因此获得的结果比较精确。而红墨水法则是利用活细胞的细胞膜具有选择透过性来阻碍染料大分子进入细胞，但这种选择透过性是相对的，时间一长也会有部分染料大分子进入到活细胞中使得活种子的胚也会被染成红色，因此获得的结果就不太精确。

7.若需用40×的高倍物镜观察植物细胞结构，试述显微镜使用的先后步骤。 答：（1）接通电源或调节反光镜，使显微镜对光。 （2）调节粗调节螺旋，以低倍镜对焦。

（3）低倍镜寻找需观察的细胞，并将其移动到视野的中央。 （4）转换高倍镜，调节细调节螺旋，直到观察清晰为止。

8. 用电导率仪法测定植物的抗逆性时要注意哪些问题？ 答：（1）一切用具、器皿在使用前必须清洗干净。

（2）温度对溶液的电导率影响很大，因此，所有样品必须在相同的温度下测

定。

（3）所用的溶液应为去离子水或蒸馏水，不能用自来水。

（4）植物材料浸入去离子水后要不时摇动，让材料与水发生充分的交换，使


电解质外渗。



9. 试述小液流法测定植物组织水势的基本原理和实验操作过程。 答：（1）基本原理是：当植物组织与外液接触时，如果植物组织的水势低于外液的水势，组织吸水而使外液浓度、密度变大；反之，则组织失水而使外液浓度、密度变小；若两者相等，则水分交换保持动态平衡，外液浓度和密度保持不变。小液流法就是根据加入植物组织后外液浓度和密度的变化情况来确定与植物组织水势相同的外液浓度，然后根据公式计算出溶液的水势，即为植物组织的水势。 （2）实验操作过程：

① 编号和取液：取干燥洁净的大试管和青霉素瓶各6个编号。并在大试管中各加入对应浓度的蔗糖溶液约2/3管的量，青霉素瓶里各加入对应浓度的蔗糖溶液2ml。

② 取材：用打孔器打取小叶圆片若干。

③ 处理：每个青霉素瓶里放入20片小叶圆片处理30分钟。 ④ 染色：每个青霉素瓶里加入少量甲烯蓝至溶液呈淡兰色。

⑤ 检测和记录：加兰色小液滴于同浓度的蔗糖溶液中，观察兰色小液滴的上下移动情况并记录。 ⑥ 结果计算：将找到的等渗溶液的浓度代入到公式中即可计算植物组织的水势。

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