30 生物化学实验--大肠杆菌热休克蛋白表达的临界温度研究

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大肠杆菌热休克蛋白表达的临界温度研究

【研究背景】

蛋白质的表达不但具有时空性，而且还具有环境应答的特异性。分析某种蛋白质的表达变化，常用的方法是蛋白质印迹（ Western blotting ）。大肠杆菌受到高温胁迫，将表达热休克蛋白，热休克蛋白具有分子伴侣功能，可以阻止蛋白质高温变性，并修复变性蛋白，提高大肠杆菌的耐热性。测定热休克蛋白的临界温度是研究热休克蛋白的基础工作。 【研究策略】

用不同的温度培养大肠杆菌（其它培养条件相同），然后取样分析。 【推荐方案】

大肠杆菌 37℃ 振荡培养过夜

↓

用不同的温度培养大肠杆菌

↓ 提取蛋白质

↓ SDS-PAGE

↓

Western blotting

【研究任务】

测定热休克蛋白表达的临界温度。 【参考建议】

1 ．参考实验六和实验二十五的有关操作步骤。

2 ．测试温度可以选择在 30 ～ 42℃ 之间，每隔 2℃ 设定温度梯度。 3 ．蛋白质提取方法很多，建议查阅资料后，选择最简单易行的方法。


4 ．热休克抗体可以自制或购买成品， HSP70 、 HSP60 和小分子热休克蛋白都是很好的研究对象。

5 ． Western blotting 方法可以查阅资料后，根据本研究酌情改动实验条件。

本文来源：https://www.wddqxz.cn/e2b3230bde80d4d8d15a4fe9.html