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淀粉的水解速度与底物聚合度有关,相对分子质量愈小的底物愈难被水解;分支愈多的底物也愈难被水解;对愈靠近α-1,6糖苷键的α-1,4糖苷键也愈难水解;对于分支点α-1,6糖苷键邻近的1~2个α-1,4糖苷键几乎没有作用。在水解中等长度的麦芽低聚糖时,优先水解靠近还原末端的α-1,4糖苷键。
(2)地衣芽孢杆菌α-淀粉酶 此酶相对分子质量62000,突出特点是热稳定性高,最适作用温度在90oC以上,在淀粉乳液化中应用的温度高达110-115oC,可使淀粉间歇液化和连续液化。所需Ca2+量很低,丹麦产termanyl酶就是一种地衣芽孢杆菌α-淀粉酶,液化时只需要5mg/kg Ca2+。相同情况下枯草芽孢杆菌α-淀粉酶则要求150mg/kg,相差30倍。对termanyl酶,淀粉乳中的Ca2+就可满足要求,不需另外添加Ca2+,这样可在液化后的精制工序中省去除Ca2+的工序。
液化过程中,先产生G5(麦芽五糖)和G5以上长链物,之后再缓慢水解成G2(麦芽糖)和G3(麦芽三糖),液化后的水解液中主要由麦芽低聚糖和糊精组成,水解液组成的实验结果见表7-11。
表7-11地衣芽孢杆菌α-淀粉酶水解普通玉米淀粉的糖浆组成
DE值/%
DP范围
1~5 6.4 13.3 21.4 28.9
6~15 12.6 20.9 26.4 29.8
16~45 46~150 151~450 451~1250 >1250 31 16.2 11.1 13.4 9.3 29.9 16.2 8.4 7.5 3.8 26.3 13.9 5.7 4.3 2 22 11.1 4.1 2.9 1.2
8
12 16 20
(3)米曲霉α-淀粉酶 属于非耐热性α-淀粉酶,它作用于淀粉时先是从分子内部切开α-1,4糖苷键生成各种低聚糖,然后在长时间作用下将低聚糖水解成麦芽糖与麦芽三糖,因此也称麦芽糖生成酶。在50oC、pH5.0~6.0时酶活力最高,对支链淀粉底物的作用效果不如直链淀粉,要求用Ca2+增加酶的稳定性和活力。由于是内切酶,水解产物中不残留β-极限糊精,产品流动性好,常用于生产高麦芽糖浆。
三种α-淀粉酶的性质比较结果列于表7-12中。 表7-12 主要α-淀粉酶的性质比较
酶
来源
淀粉水解限度/% 35 35 48
消色点时水解度/% 13 13 16
热稳定温度/℃ 80~85 95~105 55~70
最适反应pH
钙离子保护作用浓度/(mg/L) 150 20 50
主要水解产
物 G5,G2(13%)G6(麦芽六糖) G6,G3,G2,G7 G2,G1(葡萄糖50%)
细菌常温α-淀粉酶 细菌耐热α-淀粉酶 霉菌α-淀粉
酶
枯草芽孢杆
菌 地衣芽孢杆
菌 米曲霉
5.4~6.4 5.5~7.0 4.9~5.2
4.影响α-淀粉酶作用效果的主要因素
(1)热稳定性 不同来源的α-淀粉酶具有不同的热稳定性和最适反应温度,根据热稳定性的不同,α-淀粉酶分为两类:分别是耐高温α-淀粉酶和普通
α-淀粉酶。耐高温α-淀粉酶的酶源为地衣芽孢杆菌,其最适温度在90℃以上,连续喷射液化工艺中,当液化温度达到100-115℃时,仍可以发挥作用。普通α-淀粉酶,酶源为枯草芽孢杆菌,最适温度为80℃。
(2)pH 不同来源的α-淀粉酶的稳定pH和最适pH都不同,多数α-淀粉酶都不耐酸,当pH低于4.5时迅速失活。酶活力相对稳定的pH范围在5.5-8.0,最适反应pH为6-6.5,即在此pH条件下,酶的催化反应速度最快。另外酶的催化活力和酶的稳定性是有区别的,前者指酶催化反应速度的快慢,活力高反应速度快,反之则反应速度慢;而后者表示酶具有催化活力而不时活。酶最稳定的pH不一定是酶活力的最适pH,反之,酶的最适pH不一定使酶最稳定。枯草杆菌α-淀粉酶作用的最适pH为5-7。各种不同的酶的最适pH可以通过实验测定,由于最适pH受底物种类、浓度、缓冲液成分、温度和时间等因素的影响,测定时必须控制一定的条件,条件改变可能会影响最适pH。
2+
(3)Ga的浓度 α-淀粉酶是单成分酶,钙离子对酶的稳定性起重要作用。Ga2+使酶分子保持适当的构象,从而维持其最大的活力与稳定性。钙离子与酶蛋白结合紧密,只有在低pH下,用螯合剂EDTA才能将它剥离。钙被除掉后,酶活力完全丧失,重新补充钙后,制钙离子浓度为0.01mol/L。耐高温α-淀粉
2+
酶对于钙离子的依赖性较低,50-70mg/kg的Ga浓度已足够,用自来水配料时不需要另外添加Ga2+。
(4)淀粉乳浓度 淀粉和糊精的浓度都对酶活力的稳定性有直接影响,随浓度提高,酶活力稳定性加强。以枯草芽孢杆菌α-淀粉酶为例,在淀粉浓度10%的情况下,80℃加热,1h以后活力残余约94%;在没有淀粉存在的情况下,活力残余约24%,稳定性相差约4倍。浓度提高到25%-30%时,稳定性进一步提高,煮沸以后活力也不至于完全失去。
(二)葡萄糖淀粉酶
葡萄糖淀粉酶的国际统一分类号为EC3.2.1.3,名称为α-1,4-葡聚糖基水解酶,俗称糖化酶,葡萄糖淀粉酶是一种重要的淀粉酶,是国内产量最大的水解酶品种。广泛应用于酒精、酿酒、葡萄糖及果葡糖浆的生产中。
1.酶的作用方式
大多数菌株生产的葡萄糖淀粉酶由两种同工酶组成,即葡萄糖淀粉酶Ⅰ和葡萄糖淀粉酶Ⅱ。葡萄糖淀粉酶是一种外切型淀粉酶,能从淀粉分子的非还原末端逐一水解α-1,4糖苷键,水解产物为β-型的葡萄糖。水解过程中葡萄糖单位之间的C1-O-C4中的C1-O键断裂,与α-淀粉酶一样,也是作用于长链比短链催化活性大。
虽然葡萄糖淀粉酶能优先水解α-1,4糖苷键,但对α-1,3、α-1,6糖苷键也有一定活力,只是水解速度很慢,仅为水解α-1,4糖苷键的6.6%和3.6%。葡萄糖淀粉酶水解淀粉和糊精分子时作用方式为单链式,即淀粉酶水解完一个分子后,再去水解另一个分子;但水解较小分子的低聚糖时,作用方式为多链式,即水解一个分子几次后,与其脱离再水解另一个低聚糖分子。
葡萄糖淀粉酶水解速度还受底物分子排列上的下一个糖苷键的影响。
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