试验六远志对小白鼠的祛痰作用

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远志对小鼠的祛痰作用

小鼠气管酚红法

【目的】

1．学习酚红呼吸道排泌试验筛选祛痰药的方法。 2．观察远志对小鼠气管酚红排泌量的影响。

【原理】 给小鼠腹腔注射指示剂酚红后，后者可以部分地从气管分泌排出。远志能增强呼吸道的分泌功能，从而相应增加酚红的排泌量。经碳酸氢钠溶液灌洗气管后，使灌洗液显色，灌洗液用分光光度计检测吸光度或与酚红标准管比色，可确定酚红的排泌量，从而检验药物的祛痰作用。

【材料】

1．动物 昆明种小鼠，20±2g，清洁级，雌雄兼用。

2．器材 722n型分光光度计、JY4001电子天平、离心机、注射器（1mL）、5号针头、8号针头、小鼠灌胃器、手术剪、眼科剪、眼科镊、蛙板、蛙钉、橡皮泥、丝线、试管、酚红标准管（0.1μg／mL～100μg／mL）、滤纸等。

3．药品 1g／mL远志水煎液、0.05g／mL（5%）氯化铵溶液、0.005g／mL（0.5%）酚红溶液、0.05g／mL（5%）碳酸氢钠溶液、1mol／L氢氧化钠溶液、生理盐水。

0.005g／mL酚红溶液的配制：酚红0.5g，以1mol／L氢氧化钠5mL溶解，加生理盐水至100mL。

【方法】

取6只小鼠，称重、编号，随机分为三组，每组各2只、标记，分别灌胃远志水煎液、氯化铵溶液、生理盐水0.2mL／10g。30min后，每鼠分别腹腔注射酚红溶液0.1mL／10g。30min后，处死动物，解剖分离气管，于喉头下将磨平的8号针头插入气管约0.3cm，用丝线结扎固定后，用1mL注射器抽取0.05g／mL碳酸氢钠溶液0.5mL，通过针头来回灌洗呼吸道3遍，最后1遍抽回灌洗液，注入试管中。上述操作连续重复3次，共冲洗9个来回，抽得灌洗液1.5mL（极限量，尽可能回抽获得），混匀于同一试管中。

酚红浓度的测定： 方法1：灌洗液经3000r／min，15min离心后取上清液，用722n型分光光度计、波长546nm，读取吸光度。吸光度代入标准曲线方程，换算出相应的酚红浓度。

方法2：灌洗液与不同浓度酚红标准管比对颜色，按颜色接近程度确定相应灌洗液酚红浓度。 汇总全班实验结果，进行单因素方差分析，检验远志能否增加气管酚红排泌量。 【结果】

表 远志对小鼠气管酚红排泌量的影响（ x±s）

组别

药物

剂量 （g／kg）

— 1.0 20.0

动物数 （n）

气管酚红排泌量 （μg／mL）



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阴性对照组 生理盐水 阳性对照组 氯化铵溶液 受试给药组 远志水煎液 【注意事项】

1．酚红必须准确注入腹腔内。

2．解剖操作及针头插入气管时应避免损伤血管，以免血液混入灌洗液而干扰比色。 3．必须按时处死动物，及时灌洗；事先应掌握好个体间实验间隔时间。 4．灌洗操作应轻盈连贯，抽得灌洗液量应一致。 5．标准曲线适用于同批次实验。 【讨论】 【结论】

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