人PD-L1Ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

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人PD-L1Ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

陈永井;姜智;张光波;毛一香;瞿秋霞;葛彦;杨明峰;张学光

【期刊名称】《现代免疫学》【年(卷),期】2004(24)6

【摘要】为获取人PD L1Ig融合蛋白 ,研究其对T细胞的调节效应 ,采用PCR法从pMD18 T/PD L1中扩增出人PD L1基因的胞外段序列 ,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1Fc恒定区基因 ,两者拼接后插入逆转录病毒载体pEGZ Term ,用脂质体法与两个辅助病毒载体共转染 2 93T包装细胞 ,用含病毒颗粒的培养上清反复感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选能稳定分泌人PD L1Ig蛋白的基因转染细胞并亚克隆之 ,经无血清培养 ,收集的上清用Dotblot检测、ELISA定量后 ,浓缩并经ProteinG柱纯化 ,再经Westernblot鉴定。以FACS分析纯化蛋白对活化T细胞表达的PD 1结合能力 ,以体外T细胞活化体系观察其对T细胞表型的调节作用。结果表明 ,成功地构建了表达人PD L1Ig蛋白的重组逆转录病毒载体 ;获得的L92 9/PD L1Ig细胞能稳定分泌人PD L1Ig蛋白 ;该蛋白与PD 1受体具有良好的结合能力 ,能抑制T细胞的进一步活化。【总页数】6页(P449-454)

【关键词】PD-1;PD-L1;TP-PCR;稳定表达;抑制

【作者】陈永井;姜智;张光波;毛一香;瞿秋霞;葛彦;杨明峰;张学光【作者单位】苏州大学生物技术研究所【正文语种】中文

【中图分类】R392.11 【相关文献】

1.人IL-17F融合蛋白在E.coli中表达及其生物学活性研究 [J], 谢宇锋;盛伟华;缪竞诚;杨吉成

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3.人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性 [J], 吕宏亮;陈勇;李武平;段招军;魏开坤;赵军;侯云德

4.人可诱导共刺激分子胞外片段和小鼠免疫球蛋白Ig融合基因的表达及生物学活性鉴定 [J], 王健;张军;张燕;沈茜

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