人热休克蛋白90β-cDNA基因克隆及其真核表达载体的构建

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人热休克蛋白90β-cDNA基因克隆及其真核表达载体的构建

刘涛;赵菊梅;田聆;魏于全;梁传余

【期刊名称】《生物医学工程学杂志》【年(卷),期】2006(23)6

【摘要】本研究旨在克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-hHSP90β,为研究hHSP90β的基因治疗奠定实验基础。按Invitrogen公司操作说明用TRIzolReagent提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA。用纯化的hHSP90βcDNA与PGEMEasyTVector连接,挑选白色菌落进行鉴定,结果为重组质粒,命名为PGEM-hHSP90β。将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化XL1-blue,经复苏后,在含Ampr的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。挑取的LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)-hHSP90β。采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插入了真核表达载体pcDNA3.1(+)中。【总页数】5页(P1289-1293)

【关键词】热休克蛋白90β(HsP90β)真核表达载体质粒pcDNA3.1(+) 【作者】刘涛;赵菊梅;田聆;魏于全;梁传余

【作者单位】四川大学华西医院耳鼻喉科;四川大学华西医院肿瘤生物治疗研究中心.人类疾病生物治疗教育部重点实验室

【正文语种】中文【中图分类】R739.63 【相关文献】

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