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石斛是一种名贵中药,《药性论》谓石斛益气除热,补肾益精。《本草》谓石斛益精强阴,壮筋补虚。中药石斛是指金钗石斛等多种同属植物物茎。
石斛药用有效成分的研究,已分离出石斛碱,并对其生物碱方面作了大量研究工作。但尚未见其他学者关于该属植物水溶性多糖的研究报道。
石斛药用强壮的功效引起了我们结其水溶性多糖类的兴趣。我们对铁皮石斛进行了提取分离,分析及药理试验。药理试验结果证实它能增强机体的免疫功能。
方法:
1、铁皮石斛多糖的提取、分离和制备:风干植物材料粉碎后甲醇回流除去杂质,药渣热水提取4次,合并水提液,减压浓缩,加4倍95%乙醇静置过夜,分出沉淀物溶于蒸馏水,Sevag法脱蛋白。上清液加4倍95%乙醇、丙酮、乙醚洗涤。挥去溶剂,真空干燥得粗制品,收得率为风干材料重的15%。粗制品溶于水,滤去不溶物,滤液用溴化十六烷基三甲胺(CTAB)络合精制,得精制品供分析及药理试验。
2、红外光谱测定:使用71-IR仪器,样品用溴化钾片法测定。
3、多糖的单糖组分的分离和鉴定:样品用2mol/L硫酸水解6h,碳酸钡中和,滤液浓缩后作薄层层分析和高压液相色谱分析,薄层层析法用硅胶G以0.5%CMC-N调糊,按常规制板(5×20cm),105℃活化验室1h,.使用2对不同的展开剂:1、醋酸乙酯-醋酸-甲醇-水(12:3:3:2);
4、氯仿-甲醇-水(16:9:2)。苯胺-邻苯二甲酸显色,对照标准样品的R值定性。高压液相色法采用WatersALC/GPC244℃仪,醣专用分析柱u-Bondapak,流动相乙腈-水(80:20),流速2.0ml/min,柱温30.5℃.要相同的色谱条件下对照糖的标准样品的保留时间定性.各单组分的相对百分含量根据其积分的峰面积计算.
5、铁皮石斛多糖含量的测定:取风干样品粉碎,精密称取样品,经石油醚(60~90℃)脱脂2次。挥去溶剂,经多次85%乙醇热提除去醇溶性糖等,水浴温度50℃,直至浸出液。
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