大鼠热休克蛋白70HSP

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大鼠热休克蛋白 70(HSP-70) 酶联免疫分析( ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用大 鼠血清，血浆 及相关 液体 样本中热休克蛋白

70(HSP-70)的含量。

试剂盒性能：

样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。

2. 批内与批见应分别小于 9%和 11% 检测范围：

1.

请来电咨询 保存条件及有效期：

1.试剂盒保存： ； 2-8℃。 2．有效期： 6 个月 注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本

OD 值

大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(× n× 5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9． 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠热休克蛋白 70(HSP-70) 水平。用纯化的 大 鼠热休克蛋白 70(HSP-70) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 热休克蛋白 70(HSP-70) ，再与 HRP 标记的 热休克蛋白 70(HSP-70) 抗体结合，形成抗体 -抗 原-酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 热休克蛋白 70(HSP-70) 呈 正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值)，通过标准曲线计算样品中 大鼠热 休克蛋白 70(HSP-70) 浓度。

样本处理及要求 ：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清，

保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心

20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离

心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程 中

如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。


4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/

分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分 钟左右（ 2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（ PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试

验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融 .

7. 不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 试剂盒组成 ：

试剂盒组成 说明书 封板膜 密封袋 酶标包被板 标准品： 2700ng/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂 A 液 显色剂 B 液 终止液 浓缩洗涤液 操作步骤

48 孔配置 1份 2 片（ 48 ）

1个 1×48 0.5ml × 1 瓶 1.5ml ×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3ml× 1 瓶

96 孔配置



保存



1份 2 片（ 96 ）



1个 1× 96 0.5ml ×1 瓶 1.5ml ×1 瓶 6 ml× 1 瓶 6 ml× 1 瓶 6 ml× 1 瓶 6 ml× 1 瓶 6ml× 1 瓶

2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存

（ 20ml× 20 倍）× 1 瓶 （20ml×30 倍）× 1瓶

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔

10 孔，在第一、第二孔中分别加标

准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、 第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取

50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液

50μl ，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50 μl ，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl， 浓度分别为 1800ng/L ， 1200ng/L ， 600ng/L ， 300ng/L ， 150ng/L ）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样 品

孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（ 样

品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

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