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泸州医学院公共卫生实验教学中心
《卫生化学》实验报告
专业 预防医学 班级 1班 姓名 杨秀程 第 2 次实验 实验日期 2013 年 4 月 1 日 地点 实验室 指导教师 谢老师 实验题目: 紫外可见分光光度法绘制Fe标准曲线 预习情况:
一、实验目的与要求:
掌握紫外可见分光光度法分析条件选择的方法; 熟悉紫外可见分光光度计的使用方法; 了解用邻二氮菲测定微量Fe的原理。
二、实验原理:
邻二氮菲是测定微量Fe的一种优良显色剂。在pH=3-9的溶液中,邻二氮菲
与二价Fe作用生成橙红色配合物,其lg K=21.3,最大吸收波长为510nm,摩尔吸光系数为1.1×10^4.在一定范围内,二价Fe的浓度与吸光度符合比尔定律。
三、仪器与试剂
1.仪器与器皿 紫外分光光度计,25ml容量瓶,胶头滴管,1ml移液管
2.试剂 1.000×10^-3mol/L铁标准溶液,1.5g/L邻二氮菲,100g/L盐酸羟胺溶液,1mol/L醋酸钠溶液,去离子水。
四、实验步骤:
1.配液 取6个25ml容量瓶,分别加人0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 1.000×10^-3mol/L铁标准溶液, 0.5ml100g/L盐酸羟胺溶液,摇匀后,再分别加入1.00ml 1.5g/L邻二氮菲,2.50ml 1mol/L醋酸钠溶液,用去离子水定容至刻度,摇匀。
2.吸收曲线绘制
用最大浓度配置的溶液到入吸收池,在分光光度计上从波长440nm到560nm每隔5nm测量一次吸光度,在最大吸收波长附近每隔2nm测量一次吸光度。然后以波长为横坐标,吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。从曲线上找出最大吸收波长。
3.标准曲线绘制
以试剂空白为参比溶液,在选定的最大吸收波长下测量各溶液的吸光度。绘制出标准曲线,求出线性回归方程和相关系数。
五、实验数据及结果:
最大吸收波长:λmax=509.75
标准曲线:
回归曲线方程:Y=87.14458X+0.0199 R=0.99927
六、讨论:
紫外可见依然需要分为两步,先是光谱测定,确定最大吸收波长,然后再是光度的测定,在实验中不仅要规范操作,更要谨慎,这样才能保证R的值!
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