发酵工艺流程

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发酵工艺标准操作流程 (SOP)

一生产前准备

每次生产前按品种配方将所需原料称重准备齐全，并确认生产原料库存量，保证原料库存量足够下次生产所需。

二生产前检查

1检查蒸汽、压缩空气、冷却水进出的管路是否畅通，所有阀门是否良好,并关闭所有阀门。 2检查电路、控制柜、开关的状态,确保控制柜运行正常.

3检查空压机油表油表及轴承、三角带、气缸等是否正常,确保空压机运行正常。 4检查发酵罐搅拌减速机的油量及密封轴降温水是否正常.

三总过滤器灭菌

当蒸汽总管路上的压力为0.2-0.25MPa时,打开总过滤器进气阀输入蒸汽，同时打开出气阀的跑分阀、排气阀、排污阀,当三个阀均排出蒸汽时，调整进气阀、排污阀，稳定总过滤器压力0.15-0.2MPa，此时打开压力表下跑分,计时灭菌2-2。5小时。灭菌结束后启动空压机，当空气输入管道压力大于总过滤器压力时,关闭蒸汽阀，打开空气阀，将空气出入总过滤器，然后调整进气阀与排污阀,稳定总过滤器压力在0.15—0。2MPa,保持通气在15—20小时,当出气阀跑分和排污阀放出的空气为干燥空气时,完成灭菌。

四分过滤器灭菌

1当蒸汽管路压力为0.2-0.25MPa时,打开蒸汽过滤器的进气阀和排污阀,当蒸汽管路中无蒸汽凝结液后,再将蒸汽输入空气管路,然后打开分过滤器的进气阀、排污阀及出气阀上的跑分，当所有阀门均有蒸汽排出后，调整进气与排污阀，是压力稳定在0.11—0.15MPa,计时灭菌30—35分钟。灭菌结束后,关闭蒸汽过滤器进出气阀、排污阀,并立即将空气输入预过滤器，使空气通过预过滤器进入到分过滤器,再调整分过滤器排污阀使压力稳定在0.11—0。15MPa,备用。




五发酵罐空消 （可与分过滤器灭菌同时进行）

空消前先将发酵罐去垢洗净,添加少量清水,然后密封进料口,将排气阀打开少许，同事将蒸汽引入盘管(或夹套)进行预热，待罐温升到80℃时（种子罐40℃即可）,关闭盘管（或夹套)进气阀,再从出料口、进气口、取样口三路输入蒸汽,（蒸汽管路压力不低于0.2—0.25MPa),当罐内温度达到125-130℃时,通过三路蒸气浴出气阀调整罐内压力，使其稳定在0.11-0.15MPa,计时灭菌30-35分钟。

空消结束后，关闭所有进气阀并将排气阀开大,当罐内压力下降至0MPa后，打开进料口和排污阀,再将发酵罐进行一次冲洗。

六发酵罐实消

打开进水阀,按照生产要求放入所需水量,再根据生产品种按配方依次投入培养基原料，并同时打开搅拌，搅拌5-10分钟后取样，用氢氧化钠和浓盐酸调PH值7。2—7。5之间，然后密封进料口将排气阀打开少许,同时打开盘管(或夹套)的进出气阀门输入蒸汽进行预热，等到罐内温度到达80℃以上后,关闭盘管(或夹套)进气阀门，并将排气阀关小,然后将蒸汽从进气口、出料口、取样口三路直接通入罐内，当罐内温度上升到121-125℃后,打开发酵罐体上与空气进气阀上的所有跑分,再通过调整三路进气与排气阀将罐内压力稳定在0.11-0。15MPa,此时开始计时灭菌30—35分钟,灭菌期间将搅拌停止。灭菌结束后,关闭所有进蒸汽阀门，将排气阀开大，同时开启搅拌,并立即打开进气阀,输入无菌空气，保证罐压不低于0。05—0.06MPa（当发酵罐通入无菌空气后,一定注意分过滤器与空气总管路压力一定要大于发酵罐内压力），打开盘管(或夹套）冷却水进出阀门（确定蒸汽出阀门关闭),开始降温，按照不同菌种接种温度要求控制降温结束时间(一般在34℃左右),降温结束后即可接种.

七接种

1种子罐接种

先将进气阀逐渐关闭,同时将排气阀开大，当罐体压力表与空气流量计降到0刻度时,关闭排气阀,用酒精棉围在接种口四周并点燃,然后打开接种口,将制备好的菌种孢子悬浮液在火焰中直接从接种口倒入罐内,马上关闭接种口,同时迅速打开进气阀使罐内压力上升到0.05MPa以上，打开排气阀，调整进气与排气阀使罐内压力稳定在0.05—0。06MPa 2培养罐接种

接种前应先将蒸汽输入接种管道,再把接种管道两端的跑分打开，当跑分都有蒸汽排出时，计时灭菌15—30分钟，灭菌结束后关闭跑分和进蒸汽阀,将种子罐排气阀关小,当种子罐内压力大于培养罐压力后，先将接种管道进口阀门打开，再打开培养罐端出口阀开始接种，接种量按不同菌种生产需求控制。接种完毕后，先将培养罐端出口阀关闭，再将接种管道进口阀关闭,完成接种，最后把种子罐所有进出气阀门关闭，停止搅拌。




八发酵罐培养控制

接种后调整进气阀与排气阀，将罐内压力稳定在0。05-0。06MPa，同时按照不同菌种的需求调整好罐内的温度和通气量

当罐内温度超出或者低于标准温度时,打开盘管或夹套进出阀门，出入冷却水或者蒸汽，等温度达到标准温度后关闭进出阀门,停止冷却水或者蒸汽的输入,这就完成了一次温度的控制调整.

通气量的控制，按照不同菌种的要求,在确保管内压力稳定的前提下,根据空气流量计的显示,通过进气阀和排气阀的调整进行通气量的调整。

冬季结冰期到来以后，每次生产停止后,应把蒸汽和空气管路及发酵罐盘管或者夹套的冷凝水和冷却水排尽，排不尽的可用空气把水吹出来，以防止冻裂管路和设备，给生产造成不便.

九取样与放罐

取样检测时间，按照生产菌种的种类来制定12—16小时不等,开始取样检测后，前期每2小时一次,后期取样时间缩短为0。5—1小时，每次取样前后都要对取样口进行10-15分钟灭菌处理，。当取样检测,发现符合芽孢大量形成，芽孢含量≥70％，杂菌量≤3％,含菌量≥30*108CFU/ml的放罐指标时,即可放罐.

十发酵生产流程记录

在发酵生产过程中，从生产准备—生产前检查—空气过滤器灭菌—发酵罐空消—发酵罐实消—接种—培养控制—放罐等每一个工艺流程环节,必须有详细的操作记录,放罐后应将表交到质量控制中心存档,生产记录保存三年.

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