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蒽铜的比色法
1.原理:糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛,生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物,其颜色深浅与溶液中糖的浓 度成正比,可比色定量。 2.试剂
(1) 硫酸锌溶液:溶解500g化学纯硫酸锌于500ml水中
(2) 亚铁氰化钾溶液:溶解10.6g化学纯亚铁氰化钾于100ml水中
(3) 0.2%蒽铜试剂:溶解蒽铜0.2g于100ml95%硫酸中,置棕色瓶中冷暗处保存 (4) 0.1%葡萄糖液:准确称干燥葡萄糖0.1000g 定容100ml 3.操作方法
(1) 标准曲线绘制
(2) 100ml容量瓶编号
沸水浴加热6分钟,取出冷却→用1cm比色杯→610nm测定吸光度→作出以吸光度为横坐标,糖液浓度为纵坐标的准 曲线
(3)样品测定
称10g样品→于100ml热水加入500ml容量瓶中-加硫酸锌5ml→沸水浴5分钟→取出再摇动下加亚铁氰化钾5ml,→冷却→定容500ml→过滤→吸滤液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀释液1ml,于比色管中→加10ml蒽铜试剂→摇匀→水浴加热6分钟→冷却→比色 试验注意
1,样液必须清澈透明,加热后不应有蛋白质沉淀
2,样品颜色较深时,可用活性炭脱色后再进行测定
3,此法与所用的硫酸浓度和加热时间有关 4,所取糖液浓度在1-2.5mg/100ml之间
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