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货号：MS2930 规格：100管/48样
土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-AI在pH 为4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
测定原理：
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 试剂组成和配制：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃ 保存;
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃避光保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤和加样表：
试剂名称（μL） 测定管 对照管 风干土样（g） 0.05 0.05
试剂一 400 试剂二 400
混匀， 37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后 充分混匀（以保证浓度不变），10000g 25℃离心10min，取上清液
上清液 200 200 试剂三 100 100
混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm处，记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。
S-AI活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。 单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。 S-AI活力（mg/d /g土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001) V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。 b.用96孔板测定的计算公式如下
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标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。 单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。 S-AI活力（mg/d/g土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反总÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001) V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。
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本文来源：https://www.wddqxz.cn/6ef9f6a077eeaeaad1f34693daef5ef7ba0d1226.html
2022-12-10
