酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达

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酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达

贾宁;熊向华;赵岩;汪建华;何建勇;张惟材

【期刊名称】《生物技术通讯》 【年(卷),期】2010(021)005

【摘 要】目的:从酮古龙酸菌5CB329中分离细胞色素c(Cytc)相关基因,在大肠杆菌中进行表达并验证.方法:根据酮古龙酸菌SCB329基因组序列设计引物,通过PCR从5CB329基因组中扩增cytc基因,酶切后连接pET22b表达载体,转化至大肠杆菌DH5α后提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌B121(DE3),并对表达条件进行考察;用Chelating Sepharose珠粒对可溶性的Cytc-His融合蛋白进行纯化;经光谱扫描和血红素染色等方法对表达蛋白定性分析.结果:PCR扩增的cytc基因长513 bp;重组菌在IPTG浓度为0.025mmol/L的条件下,于28℃诱导10h后,SDS-PAGE分析可见表达条带,相对分子质量约为18×103;Ni柱亲和层析纯化得到目的蛋白,纯化蛋白经光谱扫描呈现Cytc特征峰,血红素染色呈现阳性结果.结论:从酮古龙酸菌SCB329中分离得到一种cytc基因,并表达纯化了融合蛋白Cytc-His,纯化蛋白呈现Cytc特性,为研究酮古龙酸菌中产酸关键酶的电子传递机制奠定了基础. 【总页数】4页(P619-622)

【作 者】贾宁;熊向华;赵岩;汪建华;何建勇;张惟材

【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工


程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 【正文语种】中 文 【中图分类】Q78 【相关文献】

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