CTAB法提取DNA步骤

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CTAB法抽提DNA： 所用药品:

1. CTAB(十六烷基三甲基溴化胺) 2. EDTA (乙二胺四乙酸) 3. Tris-base (三羟甲基氨基甲烷)

Β-巯基乙醇、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇 操作步骤:

注意: CTAB提取液加入 0.2% beta-巯基乙醇预热

10×TE溶液稀释为工作液.

(1) CTAB提取液(2% w/v CTAB, 1.42 M NaCl, 20mM EDTA, 100mM Tris-Cl,0.2% beta-巯基乙醇) 在60°C预热； (2) 研磨，并分装于700μL的抽提液；

(3) 65°C约30分钟，加入570μL 氯仿：异戊醇充分摇匀约15秒； (4) 常温下13000rpm，离心10分钟，转移上清；(可重复步骤3一次) (5) 加入0.7v/v的异丙醇，充分混匀，室温静置10-30分钟； (6) 常温下13000rpm，离心10分钟，70%乙醇洗涤； (7) 去残液后空气干燥，15-20μLTE溶解，并电泳检测。 ⑻ 用分光光度计进行DNA纯度检测(260nm, 280nm) (7) DNA浓度（1OD260nm≈50ug）

淀粉酶活性实验 (1) 酶液制备：

A: 称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数min搅动1次，使其充分提取。然后在3000rpm下离心10min，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10ml，放入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，


即为淀粉酶稀释液。

B: 唾液淀粉酶液。每组同学实验前自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5 min后使其注入量筒并并稀释至200倍，混匀备用。

(2) 1%淀粉溶液：将1g可溶性淀粉及0.3g 氯化钠混悬于5ml蒸馏水中，搅动后，

缓慢倒入沸腾的60ml 蒸馏水中，搅动煮沸 1min ，冷却至室温，加水至100ml, 置于冰箱中保存。 (3) 碘化钾-碘液：称取2g 碘化钾溶于5ml 蒸馏水中，再加入1 g 碘，待碘完全

溶解后，加蒸馏水295ml, 混匀贮于棕色瓶中。 (4) 缓冲液系统配制表：

pH值

0.2mol/L磷酸氢二钠溶液体积（ml） 0.1mol/L 柠檬酸溶液体

积（ml）

5.15 6.05 7.72 9.72

4.85 3.95 2.28 0.28

5.0 5.8 6.8 8.0

(5) pH对酶的活性影响 取5支试管编号

缓冲溶液体积（ml）

试管号

pH 5.0

1 2 3 4 5

(6) 将上述各管溶液混匀后，将4支试管置入37℃中保温

(7) 待3号管中颜色褪去时观察各管颜色，并在可见光660nm处进行分光光度计

测定，记录结果。

3 0 0 0 0

pH 5.8 0 3 0 0 0l

pH 6.8 0 0 3 0 3

1%淀粉稀释唾

碘液

溶液体液体积

（滴）

（ml） pH 8.0 积（ml） 0 0 0 3 0

1 1 1 1 1

1 1 1 1 1

1 1 1 1 1（水）

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