老鼠肝门静脉灌流实验

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1． 麻醉：麻醉老鼠并针扎固定于泡沫板

2． 分离肝门静脉：用棉签拨开胃肠，于其后可见两条较粗静脉（最粗的为下腔静脉，需分

离部分组织后才可见，第二粗的即为肝门静脉）

3． 灌流：温浴后连通I液，低流速灌流，如果入针顺利肝叶会血色渐退变成白色，I液进去

40ml左右后，流速控制在30-45之间。II液用之前一直保持37℃温浴，用前加入1管胶原酶，将转速调慢-关闭-换II液，慢慢升速至40-45左右，进液30ml左右后停止灌流，分离肝组织（去除胆囊）

4． 洗肝：在无血清的DMEM中用力甩洗几次，消化完全会散落大量肝细胞，最后只剩下一

个空的肝躯壳

5． 离心：150rpm-120-100-80-60-60 各离心2min

6． 计数铺板：由于正常干细胞无法增殖，故保持在一定密度

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