项目实施技术路线图模板

2022-12-28 21:27:21 文档大全网 [ 字体：小中大 ] [ 阅读： ]

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正常组

SD大鼠分组正常组、模条件应激制备内脏

高敏感大鼠模型型1组和模型2组各10

腹腔注射白蛋白制备内脏高敏感大鼠模型差异蛋白质点的切取胰酶对脱色后蛋白质的消化

大鼠结肠黏膜Western Blot验证

健康人和IBS患者各6例结肠黏膜Western Blot验证根据其DNA序列，按照同源重组原理，建立打靶载体

打靶载体注射入胚泡中

ES细胞培养,以筛选发生定点重组的ES细胞

植入子宫

通过鉴定，获得嵌合体小鼠

1. 观察和检测其基因敲除小鼠生物

学特征的改变，以明确此基因功能 2. 用AWR评分评估此基因敲除小鼠

的内脏敏感性，以明确此基因是否为IBS的致病原因

正常组和模型1、2组样品的制备

DIGE试剂(Cy2、Cy3、Cy5) 标记

蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离

荧光扫描、分析差异蛋白质

质谱的多肽指纹图、微测序分析

生物信息学分析，获得差异蛋白质DNA序列

初步筛选出IBS差异蛋白质和分子标记物

筛选某个差异蛋白质进行功能研究

导入胚胎干细胞（ES）

繁殖，获基因敲除纯合体小鼠